1.范围
本标准规定了食品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的气相色谱方法。
本标准适用于酱油、醋、饮料及果酱中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的测定。
2.原理
试样酸化后,对羟基苯甲酸酯类用乙醚提取,浓缩近干用乙醇复溶,并利用氢火焰离子化检测器气相色谱法进行分离测定,保留时间定性,外标法定量。
3.试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂
3.1.1 无水乙醚(C2H5OC2H5):重蒸。
3.1.2 无水乙醇(C2H5OH):优级纯。
3.1.3 盐酸(HCl)。
3.1.4 氯化钠(NaCl)。
3.1.5 无水硫酸钠(Na2SO4)。
3.1.6 碳酸氢钠( NaHCO3)。
3.2 试剂配制
3.2.1 饱和氯化钠溶液:称取40g氯化钠(3.1.4)加100mL水充分搅拌溶解。
3.2.2 碳酸氢钠溶液(10g/L):称取1g碳酸氢钠(3.1.6),溶于水并稀释至100mL。
3.2.3 盐酸溶液(1:1):量取50mL盐酸(3.1.3),用水稀释至100mL。
3.3 标准品
3.3.1 对羟基苯甲酸甲酯(C8H8O3),纯度≥99.8%。
3.3.2 对羟基苯甲酸乙酯(C3H10O3),纯度≥99.7%。
3.3.3 对羟基苯甲酸丙酯(C10H12O3),纯度≥99.3%。
3.3.4 对羟基苯甲酸丁酯(C11H14O3),纯度≥99.7%。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 单个对羟基苯甲酸酯类标准储备液(l.00omg/mL):准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸丙酯标准物质各0.0500g于50.0mL容量瓶中,用无水乙醇溶解并定容至刻度,置4℃左右冰箱保存,可保存1个月。
3.4.2 对羟基苯甲酸酯类标准中间液(100μg/mL):分别准确吸取单个对羟基苯甲酸酯类标准储备液(3.4.1)1.0mL于10.0mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。临用时配制。
3.4.3 对羟基苯甲酸酯类标准工作液1～5:分别吸取对羟基苯甲酸酯类标准中间液(3.4.2)0.40mL、1.0m、2.0mL、5.0mL、10.0mL于10.0mL容量瓶中,用无水乙醇稀释并定容。此即为4.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL的标准工作液1～5的浓度,临用时配制。
3.4.4 对羟基苯甲酸酯类标准工作液6和标准工作液7(200μg/mL、300μg/mL):分别吸取对羟基苯甲酸酯类标准储备液(3.4.1)2.0mL、3.0mL于10.0mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。临用时配制。
4.仪器与设备
4.1 气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)。
4.2 天平:感量0.1mg和1mg。
4.3 旋转蒸发仪。
4.4 涡旋混匀器。
5.分析步骤
5.1试样制备
5.1.1 试样处理
5.1.1.1 酱油、醋、饮料:一般液体试样摇匀后可直接取样。称取5g(精确至0.001g)试样于小烧杯中,并转移至125mL分液漏斗中,用10mL饱和氯化钠溶液分次洗涤小烧杯,合并洗涤液于125mL分液漏斗,加廴1mL1:1盐酸酸化,摇勺,分别以75mL、50mL、50mL无水乙醚提取三次,每次2min,放置片刻,弃去水层,合并乙醚层于250mL分液漏斗中,加入10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次,再分别以碳酸氢钠溶液30mL、30mL、30mL洗涤三次,弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分,将有机层经过无水硫酸钠(约20g)滤入浓缩瓶中,在旋转蒸发仪上浓缩近干,用氮气除去残留溶剂,准确加入2.0mL无水乙醇溶解残留物,供气相色谱用。
5.1.1.2 果酱:称取5g(精确至0.001g)事先均匀化的果酱试样于100mL具塞试管中,加入1mL1:1盐酸酸化,10mL饱和氯化钠溶液,涡旋混匀1min～2min,使其为均匀溶液,再分别以50mL、30mL、30mL无水乙醚提取三次,每次2min,用吸管转移至250mL分液漏斗中,加入10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次,再分别以碳酸氢钠溶液30mL、30mL、30mL洗涤三次,弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分,将有机层经过无水硫酸钠(约20g)滤入浓缩瓶中,在旋转蒸发仪上浓缩近干,用氮气除去残留溶剂,准确加入2.0mL无水乙醇溶解残留物,供气相色谱用。
5.2 仪器参考条件
5.2.1 色谱柱:弱极性石英毛细管柱,柱固定液为(5%)苯基-(95%)甲基聚硅氧烷,30m×0.32mm(内径),0.25μm(膜厚),或等效柱。
5.2.2 程序升温条件见表1。
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