1.范围
本标准规定了婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定,第二法不适用于含有被包埋脂肪酸的测定。
2.规范性引用文件
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。
第一法 乙酰氯一甲醇甲酯化法
3.原理
乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸_—甲醇使试样中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化,用甲苯提取后,经气相色谱仪分离检测,外标法定量。
4.试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯或以上规格,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 无水碳酸钠。
4.2 甲苯:色谱纯。
4.3 乙酰氯
4.4 乙酰氯甲醇溶液(体积分数为10%):量取40mL甲醇于100mL干燥的烧杯中,准确吸取50mL乙酰氯(4.3)逐滴缓慢加入,不断搅拌,冷却后转移并定容至50mL干燥的容量瓶中。临用前配制。
注:乙酰氯为刺激性试剂,配制乙酰氯甲醇溶液时应不断搅拌防止喷溅,注意防护。
4.5 碳酸钠溶液:准确称取6g无水碳酸钠(4.1)于100mL烧杯中,加水溶解,转移并用水定容至100mL容量瓶中。
4.6 脂肪酸甘油三酯标准品:纯度≥99%,脂肪酸种类参见附录A中的表A.1。
4.7 脂肪酸甘油三酯标准工作液:按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类配制适当浓度的标准工作液,用甲苯定容并分别保存于-10℃以下的冰箱中,有效期三个月。
5.仪器和设备
5.1 天平:感量为0.01g和0.1mg。
5.2 恒温热水浴槽。
5.3 离心机:转速≥5000转/分钟。
5.4 气相色谱仪,带FID检测器。
5.5 冷冻干燥仪。
5.6 氮吹仪。
5.7 螺口玻璃管(带有聚四氟乙烯做内垫的螺口盖):15mL。
5.8 离心管:50mL。
6.分析步骤
6.1 试样处理
6.1.1 试样含水量大于5%时,冷冻干燥至含水量小于5%。
6.1.2 称取试样0.5g(精确到0.1mg)于15mL干燥螺口玻璃管(5.7)中,加入5.0mL甲苯(4.2)。
6.1.3 称取无水奶油试样0.2g(精确到0.1mg)于15mL干燥螺口玻璃管(5.7)中,加入5.0mL甲苯(4.2)。
6.2 甲酯化提取
6.2.1 试样测定液的制备
在试样(6.1.2或6.1.3)中加入10%乙酰氯甲醇溶液60mL(4.4),充氮气后,旋紧螺旋盖,振荡混合后于80℃±1℃水浴中放置2h,期间每隔20min取出振摇一次,水浴后取出冷却至室温。将反应后的样液转移至50mL离心管中,分别用3.0mL碳酸钠溶液(4.5)清洗玻璃管三次,合并碳酸钠溶液(4.5)于50mL离心管(5.8)中,混匀,5000转/分钟离心约5min。取上清液作为试液,气相色谱仪测定。
6.2.2 标准测定液的制备
准确吸取脂肪酸甘油三酯标准工作液(4.7)0.5mL于15mL螺口玻璃管(5.1)中,加入4.5mL甲苯,其他操作步骤同6.2.1。
6.3 色谱参考条件
色谱柱:固定液100%二氰丙基聚硅氧烷,100m×0.25mm,0.20μm,或性能相当的色谱柱。
载气:氮气。
载气流速:1.0mL/min。
进样口温度:260℃。
分流比:30:1。
检测器温度:280℃。
柱温箱温度:初始温度140℃,保持5min,以4℃/min升温至240℃,保持15min。
进样量:1.0μL。
6.4 试样溶液的测定
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