1.范围
本标准规定了婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定。
2.规范性引用文件
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。
第一法 高效液相色谱法
3.原理
试样中的乳糖、蔗糖经提取后,利用高效液相色谱柱分离,用示差折光检测器或蒸发光散射检测器检测,外标法进行定量。
4.试剂和材料
除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙腈。
4.2 乙腈:色谱纯。
4.3 标准溶液
4.3.1 乳糖标准贮备液(20mg/mL):称取在94℃±2℃烘箱中干燥2h的乳糖标样2g(精确至0.1mg),溶于水中,用水稀释至100mL容量瓶中。放置4℃冰箱中。
4.3.2 乳糖标准工作液:分别吸取乳糖标准贮备液(4.3.1)0mL,1mL,2mL,3mL,4mL,5mL于10mL容量瓶中,用乙腈(4.1)定容至刻度。配成乳糖标准系列工作液,浓度分别为0mg/mL,2mg/mL,4mg/mL,6mg/mL,8mg/mL,10 mg/mL。
4.3.3 蔗糖标准溶液(l0mg/mL):称取在105℃±2℃烘箱中干燥2h的蔗糖标样lg(精确到0.1mg),溶于水中,用水稀释至100mL容量瓶中。放置4℃冰箱中。
4.3.4 蔗糖标准工作液:分别吸取蔗糖标准溶液(4.3.3)0mL,1mL,2mL,3mL,4mL,5mL于10mL容量瓶中,用乙腈(4.1)定容至刻度。配成蔗糖标准系列工作液,浓度分别为0mg/mL,1mg/mL,2mg/mL,3mg/mL,4mg/mL,5mg/mL。
5.仪器和设备
5.1 天平:感量为0.1mg。
5.2 高效液相色谱仪,带示差折光检测器或蒸发光散射检测器。
5.3 超声波振荡器。
6.分析步骤
6.1 试样处理
称取固态试样1g或液态试样称取2.5g(精确到0.1mg)于50mL容量瓶中,加15mL50℃～60℃水溶解,于超声波振荡器中振荡10min,用乙腈(4.1)定容至刻度,静置薮分钟,过滤。取5.0mL过滤液于10mL容量瓶中,用乙腈(4.1)定容,通过0.45μm滤膜过滤,滤液供色谱分析。可根据具体试样进行稀释。
6.2 测定
6.2.1 参考色谱条件
色谱柱:氨基柱4.6mm×250mm,5μm,或具有同等性能的色谱柱：
流动相:乙腈(4.2)一水=70+30;
流速:1mL/min;
柱温:35℃;
进样量:10μL;
示差折光检测器条件:温度33℃～37℃;
蒸发光散射检测器条件:飘移管温度:85℃～90℃;
气流量:2.5L/min;
撞击器:关。
6.2.2 标准曲线的制作
将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积或峰髙,以峰面积或峰高为纵坐标,以标准工作液的浓度为横坐标绘制标准曲线。
6.2.3 试样溶液的测定
将试样溶液(6.1)注入高效液相色谱伩中,测定峰面积或峰髙,从标准曲线中査得试样溶液中糖的浓度
7.分析结果的表述
试样中糖的含量按式(1)计算:
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