1.范围
本标准规定了分光光度法测定淀粉及其衍生物中磷总含量的方法。
本标准适用于磷总含量不超过5%(质量分数)的淀粉及其衍生物样品。
2.术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
2.1 磷总含量 total phosphorus content
根据本标准规定的方法所测得的磷含量。
3.原理
使用硫酸-硝酸混合物消化破坏有机物质,并将磷酸盐转化为正磷酸盐,通过还原剂作用,形成称作钼蓝的磷钼酸盐,用分光光度法测定蓝色在825nm波长的吸光值。
4.试剂
应使用分析纯试剂和蒸馏水或相当纯度的水。
4.1 硫酸硝酸混合溶液:一份体积的硫酸[c=96%(质量分数),ρ20=1.84g/mL]与一份体积的硝酸(4.2)混合。
4.2 硝酸:c=65%(质量分数),ρ20=1.38g/mL。
4.3 抗坏血酸溶液:c=50g/L,此溶液保存于冰箱中至多不超过48h。
4.4 钼酸铵溶液:将10.6g钼酸铵四水化合物[(NH4)6·Mo7O24·4H2O]溶于500mL水中,移入1000mL烧瓶中,再加入500mL的10mol/L硫酸溶液使之混合并冷却至室温。
4.5 氢氧化钠溶液:c=10mol/L。
4.6 磷标准溶液
4.6.1 标准储备液:称取无水磷酸二氢钾0.4393g(精确至0.5mg),溶于水中,再定量地移入1000mL容量瓶中,用水定容至刻度,混合均匀,1mL标准储备液中含有100μg的磷。
注:磷酸二氢钾使用前须在电热恒温干燥箱内干燥1h(干燥箱温度控制在105℃±2℃),放入干燥器中冷却至室温。
4.6.2 标准使用液:用移液管吸取10mL标准储备液(4.6.1)注入250mL的容量瓶内,用水定容至刻度并摇匀。1mL标准使用液中含有4μg的磷。
5.仪器
5.1 容量瓶:50mL、100mL、200mL、250mL和500mL。
5.2 锥形瓶:50mL。
5.3 消化瓶:100mL。
5.4 移液管:1mL、2mL、5mL、10mL、15mL和25mL。
5.5 冷水浴:温度可控制在15℃～25℃之间。
5.6 沸水浴。
5.7 加热器。
5.8 干燥器:内有有效充足的干燥剂和一个厚的多孔板。
5.9 分光光度计:波长可调至825nm,并备有适当的比色皿,厚度为1.0cm。
5.10 分析天平:感量0.0001g。
注:确保清洗玻璃器皿的清洁剂不含磷。
6.操作方法
标准曲线的绘制和磷总含量测定在2h内完成。
6.1 标准曲线的绘制
取7个50mL的锥形瓶(5.2),用移液管(5.4)分别吸取0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL和10.0mL的磷标准使用液(4.6.2)于7个锥形瓶内,它们分别对应于0μg、4μg、8μg、12μg、16μg、20μg和40μg磷。
分别向7个锥形瓶加入水,使瓶内溶液体积达到30mL,并混合均匀。用移液管依次加入4mL钼酸铵溶液(4.4)、2mL抗坏血酸溶液(4.3),加完后立即混合均匀。
将7个锥形瓶置于沸水浴(5.6)中10min,立刻转至冷水浴(5.5)中,冷却至室温。定量地将烧瓶内溶液转移至50mL容量瓶(5.1)中,加水至刻度,混合均匀。
以未加标准使用液的锥形瓶中的溶液为空白,用分光光度计(5.9)在波长825nm下测定吸光值,并以磷的微克数对吸光值绘制标准曲线。
6.2 样品预处理
将样品混合均匀。
6.3 称样
称取0.5g样品(6.2),精确至0.0002g,此质量样品所测得的吸光值应在0.1～0.7范围之间,若不符合,则按表1调整样品质量。
6.4 消化
将样品(6.3)倒入消化瓶(5.3)中,加入15mL的硫酸-硝酸混合溶液(4.1)和适量玻璃珠(以防暴沸),并使之混合均匀,将烧瓶置于加热器(5.7)上,缓慢加热至瓶内液体微沸,继续煮沸直至棕色气体变成白色、液体变成透明为止。
若溶液出现深暗色不褪去,在继续蒸煮的同时,逐滴加入硝酸溶液(4.2)使之消失。待冷却后,加入10mL水并加热至瓶内再次出现白色蒸气为止,以除去过量的硝酸溶液。
6.5 样品液预处理
将瓶内溶液(6.4)冷却,并加入45mL水,用氢氧化钠溶液(4.5)将瓶内溶液pH值调至7。再将瓶内溶液定量地移至容积适当的容量瓶(5.1)内,加水至刻度,并充分摇匀。
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