1.范围
本标准规定了化妆品中阿莫西林、氨苄西林、哌拉四林、青霉素G、青霉素V、苯唑四林、氯唑西林、萘夫西林和双氯西林9种禁用青霉素类抗生素的液相色谱-串联质谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、结果计算、回收率与精密度,允许差等内容。
本标准适用于化妆品中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林,青霉素G、青霉素V、苯唑西林,氯唑西林、萘夫西林和双氯西林9种禁用青霉素类抗生素的定量测定。
本标准方法的检出限为10.0μg/kg，定量限为30.0μg/kg。
2.规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3.原理
采用碱性乙腈溶液提取试样中的青霉素类药物,待有机溶剂去除后定容,上液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。
4.试剂和材料
4.1 水:GB/T 6682规定的一级水。
4.2 乙腈:色谱纯。
4.3 正己烷:色谱纯。
4.4 乙酸:优级纯。
4.5 氨水:分析纯。
4.6 5%乙睛:准确量取50mL乙腈至1000mL容量瓶中,用水定容至刻度。
4.7 乙腈提取液;准确量取0.6mL氨水与100mL乙腈充分混合。
4.8 乙腈饱和的正己烷溶液:取100mL正己烷和50mL乙腈于250mL分液漏斗中,振摇1min,静置分层后,弃掉乙腈。
4.9 0.1%乙酸:准确量取1mL乙酸(4.4)至1000mL容量瓶中,用水定容至刻度。
4.10 0.1%乙酸乙腈:准确量取1mL乙酸(4.4)至1000mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度。
4.11 标准物质:纯度不小于95%。阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林和双氯西林的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量以及化学结构式参见附录A表A.1。
4.12 混合标准工作溶液:准确称取适量各标准物质(4.11)(精确至0.1mg),分别用5%乙睛溶液(4.6)溶解、定容,配制成浓度为10mg/L的标准储备溶液(4℃冰箱保存,有效期1个月)。分别量取2.50mL9种青霉素的标准储备溶液至500mL容量瓶中，用5%乙腈稀释定容，配制成500μg/L的混合标准储备溶液(4℃冰箱保存,有效期1个月)。准确移取适量混合标准储备溶液，用5%乙腈溶液稀释成浓度为10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、250μg/L的混合标准工作溶液，临用前现配。
4.13 孔径0.22μm有机滤膜。
5.仪器设备
5.1 液相色谱-三重四级杆质谱联用仪(LC-MS/MS):配电喷雾离子源(ESI)。
5.2 电子天平:感量0.1mg、0.01mg。
5.3 离心机:最大转速不低于8000r/min。
5.4 超声波清洗器。
5.5 涡旋混合器。
5.6 旋转蒸发仪。
6.测定步骤
6.1 试样处理
称取试样约0.5g(精确至0.1mg)于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL乙腈提取提取液(4.7)，于涡旋混合器上使样品分散，超声提取10min后，以8000r/min离心5min，吸出所有上层清液于另一50mL具塞塑料离心管中，加入5mL乙腈饱和的正己烷，振荡1min，弃掉正己烷。将提取液转移至鸡心瓶中，40℃水浴旋转蒸发至近干，加入2mL水溶解残渣，混匀。待测液经0.22μm滤膜过滤后，用液相色谱-串联质谱仪测定。
6.2 测定条件
6.2.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：C18色谱柱，150mm×2.1mm(内径),3.5μm或相当者;
b) 流动相：0.1%乙酸水溶液,B:0.%乙酸乙腈,梯度洗脱,梯度洗脱程序见表1;
c) 柱温：30℃;
d) 进样量:10μL。
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