1 范围
本标准规定了辣椒素的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于辣椒及以其为原料生产食品中的辣椒素、二氢辣椒素含量的测定。
本方法的检出限辣椒素为0.13mg/kg，二氢辣椒素为0.04mg/kg。
本方法的线性范围辣椒素为0.10mg/L~160mg/L，二氢辣椒素为0.04mg/L~160mg/L。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样经甲醇四氢呋喃溶液提取，过微孔滤膜，进样，用反相色谱分离，荧光检测器检测，外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有规定，仅使用色谱纯试剂，实验用水应符合GB/T 6682 一级水的要求。
4.1 甲醇(CH3OH)
4.2 四氢呋喃(C4H80)。
4.3 甲醇四氢呋喃溶液(1+1)：取200mL甲醇和200mL四氢呋喃混合均匀备用。
4.4 无水硫酸钠(NaSO4)，分析纯，用前400℃烘干30min，磨碎。
4.5 辣椒素标准品，纯度大于95%。
4.6 二氢辣椒素标准品，纯度大于90%。
4.7 辣椒素标准储备液称取0.0100g辣椒素标准品，用甲醇溶解，定容至50mL，辣椒素质量浓度为200mg/L。
4.8 二氢辣椒素标准储备液：称取0.0100g二氢辣椒素标准品，用甲醇溶解，定容至50mL，二氢辣椒素质量浓度为200mg/L。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪：带荧光检测器。
5.2 天平：感量±0.001g、±0.01g
5.3 超声波提取器。
5.4 组织捣碎机。
5.5 电动磨碎机。
5.6 恒温水浴锅。
5.7 滤膜：0.45μm，有机相。
6 分析步骤
6.1 提取
6.1.1 辣椒粉、干辣椒及固态辣椒制品
将样品用电动磨碎机磨碎，称取0.2g精确到0.0001g，于100mL具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇四氢呋喃溶液，在60℃水浴条件下，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。将滤渣连同滤纸重新用25mL甲醇四氢呋喃溶液经超声波提取器提取10min后，再重复一次。将三次过滤收集的滤液合并，在70℃~75℃恒温水浴下浓缩至30mL左右，转移至50mL容量瓶，用甲醇-四氢呋喃溶液定容。经0.45μm有机相滤膜过滤后进行色谱分析。根据试样中的辣椒素含量，必要时进行稀释，使试样中辣椒素含量在0.13mg/L~160mg/L之间，二氢辣椒素含量在0.04mg/L~160mg/L范围内。
6.1.2 鲱辣椒、辣椒酱及含水量较高的辣椒制品
将样品用组织捣碎机捣碎，称取10.00g样品于100mL具塞锥形瓶中，加人3.0g无水硫酸钠，25mL甲醇四氢呋喃溶液，震摇，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。以后同6.1.1“将滤渣连同滤纸重新…”操作。
6.1.3 辣椒油等油状制品
将样品用组织捣碎机均质，称取2.00g样品于100mL具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇四氢呋喃溶液，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。以后同6.1.1“将滤渣连同滤纸重新…”操作。
6.2 色谱参考条件
色谱柱：C18 150mm×4.6mm，粒径5μm。
流动相：甲醇+水=80+20，用前过0.45m滤膜，脱气。
流速：0.6mL/min。
荧光检测器激发波长229nm，发射波长320mm。
进样量10μL。
6.3 标准曲线的绘制
将辣椒素、二氢辣椒素标准储备液分别用甲醇稀释成质量浓度为0.2mg/L1mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mgL和160mg/L系列标准工作溶液，按6.2色谱条件测定。以辣椒素、二氢辣椒素质量浓度为纵坐标，相应的峰面积积分值为横坐标，计算标准曲线或求线性回归方程。
6.4 试液的测定
将制备好的试液在6.2色谱条件下测定，做单点或多点校准，以峰面积积分值定量。
7 结果计算与表述
试样中辣椒素、二氢辣椒素含量以质量分数v计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示，按公式(1)计算：
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