1.范围
GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中链霉素残留量的高效液相色谱测定方法。
本部分适用于蜂蜜中链霉素残留量的测定。
木部分链霉素的方法检出限为0.010mg/kg。
2.规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T 18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。
GB/T 6379-1986 测试方法的精密度 通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性(neq ISO 5725:1981)
GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696:1987)
3.原理
试样中链霉素残留用磷酸溶液提取。提取液过滤后,用阳离子交换柱和C18固相萃取柱净化。用甲醇洗脱吸附在萃取柱上的链霉素残留。用旋转蒸发器减压蒸干洗脱液。用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解残渣。溶液供带柱后衍生装置的高效液相色谱荧光检测器测定。
4.试剂和材料
4.1 甲醇:色谱纯。
4.2 乙腈:色谱纯。
4.3 正已烷:分析纯。
4.4 乙酸:分析纯。
4.5 磷酸:优级纯。
4.6 磷酸氢二钾:优级纯。
4.7 磷酸二氢钾:优级纯
4.8 氢氧化钠:优级纯。
4.9 庚烷磺酸钠:C7H15NaO3S·H2O,色谱纯。
4.10 1,2-萘醌-4-磺酸钠:分析纯。
4.11 叔丁基甲醚:分析纯。
4.12 阳离子交换柱:苯磺酸型固相萃取柱,500mg,3mL。使用前用5mL甲醇(4.1)和10mL水预洗并保持柱体湿润。
4.13 C18固相萃取柱:500mg,3mL。使用前用5mL甲醇和10mL水预洗并保持柱体湿润。
4.14 玻璃棉:磷酸浸泡。
4.15 磷酸溶液:pH=2。1000mL水中加入1ml磷酸(4.5),在pH测试仪上滴加磷酸调节溶液pH=2。
4.16 磷酸盐缓冲溶液:0.2mol/L,pH=8。称取33.46g磷酸氢二钾(4.6)和1.05g磷酸二氢钾(4.7)于2000mL烧杯中,加入900mL水并置于磁力搅拌器上搅拌,待其完全溶解后,用水定容至1000mL。在pH测试仪上滴加数滴磷酸调节溶液pH=8。
4.17 氢氧化钠溶液:0.2mol/L。称取8g氢氧化钠(4.8)溶于1000mL水中。
4.18 庚烷磺酸钠溶液:05mol/l。称取11g庚烷磺酸钠(4.9)溶于100mL水中。
4.19 庚烷磺酸钠溶液:0.01mol/L,pH=3.3。称取2.2g庚烷磺酸钠于2000mL烧杯中,加入900mL水使其完全溶解,再转入1000mL容量瓶中,用水定容至刻度。在pH测试仪上滴加乙酸(4.4)调节溶液pH=3.3。
4.20 叔丁基甲醚正已烷混合溶液·4+1。分别量取80mL叔丁基甲醚(4.11)和20mL正已烷(4.3)于100mL容量瓶中,混匀。
4.21 链霉素标准物质含量大于95%。
4.22 链霉素标准储备溶液:准确称取适量链霉素标准物质(4.2.1),用水配成0.10mg/mL的标准储备溶液贮存于4℃冰箱中。
4.23 链霉素标准工作溶液:根据试验需要,用庚烷磺酸钠溶液(4.19)稀释标准储备液(4.22)配成适当浓度的标准工作溶液。
4.24 试验用水为符合GB/T 6682-1992规定的一级水。
5.仪器
5.1 高效液相色谱仪配有柱后衍生装置和荧光检测器。
5.2 旋转蒸发器。
5.3 真空泵·真空度应达到80kPa。
5.4 pH计:测量精度±0.02。
5.5 液体混匀器。
5.6 真空固相萃取装置。
5.7 储液器:50mL。
5.8 鸡心瓶·150mL。
5.9 平底烧瓶:200mL。
5.10 微量进样器:100μL。
6.试样的制备与保存
6.1 试样的制备
对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀。对有结晶的样品,在密闭情况下,置于不超过60℃的水浴中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中,密封,并标明标记
6.2 试样的保存
将试样于常温下保存。
7.分析步骤
7.1 提取
称取10g试样,精确到0.01g,置于150mL三角瓶中。加入25mL磷酸溶液(4.15),在液体混匀器上高速混合5mm,使试样完全溶解。
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